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消毒用品凈化車間衛生管理制度

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消毒用品凈化車間衛生管理制度

Hygienic standard for disinfection in hospitals

 

中華人民共和國國家標準

GB 15982-2012 代替 GB 15982-1995

   

 

2012-06-29發布    2012-11-01實施 

 

 

 

前言

   本標準所有技術內容均為強制性。
本標準取代GB15982-1995醫院消毒衛生標準。與GB15982-1995相比,本標準的主要變化如下:
--修改了標準的適用范圍(見第一章,1995年版第一章);
--修改規范性引用文件(見第二章,1995年版第二章);
--修改術語,增加消毒產品、醫療器械和高度。中低危險設備、滅菌和高水平、中低水平消毒、多種耐藥細菌的定義(見第3章,1995年版第3章);
--修改了各種環境空氣、物體表面、醫護人員手衛生標準(見4.1、4.2,1995版4.1);
--修改醫療用品衛生標準(見4.3,1995年版4.2);
--修改使用中消毒劑的衛生標準(見4.6,1995版4.3);
--刪除無菌器械保存液衛生標準(見1995年版4.3.2);
--增加治療用水、防護用品、消毒劑、消毒器械、疫點(區)消毒衛生要求(見4.4.4.5.4.4.4.7、4.9)
--修了污水處理衛生標準和污水排放標準(見4.8,1995版4.4和4.5);
--增加醫院消毒管理要求(見第五章);
--修改了原附錄A的采樣檢查方法(見附錄A,1995版附錄A);
--修改空氣采樣及檢查方法(見A.2,1995版A.1);
--修改醫療用品采樣及檢查方法(見A.5,1995版A.5);
--增加治療用水、紫外線燈、消毒設備、醫院污水檢查方法、疫點(區)消毒效果檢測方法和大腸。
--菌群檢查方法(見A.7.A.8.A.9.A.1.A.12);
--刪除原附錄B本標準用詞說明(見1995版附錄B);
--添加新附錄B試劑與培養基(見附錄B)。
本標準由中華人民共和國衛生部提出并歸口。
本標準起草單位:浙江省疾病預防控制中心、北京市疾病預防控制中心、中國疾病預防控制中心、北京大學第一醫院、北京長江脈醫藥科技有限公司、杭州朗索醫用消毒劑有限公司、上海利康消毒高新技術有限公司、強生(上海)醫療器械有限公司、上海九宇生物科技有限公司、北京創新世紀生化科技發展有限公司、衛生部衛生監督中心、上海市疾病預防控制中心、江蘇省疾病預防控制中心、武漢市疾病預防控制中心、福建省疾病預防控制中心、浙江興昌風機有限公司。
本標準主要起草人:胡國慶、鄧小紅、張流波、李六億、喬宏、戴彥珍、孫建生、邊雪蓮、顧京宇、沈偉、徐燕、梁建生、林立旺、陳楚暉、任銀萍、王志、張一鳴。
本標準所所代替標準版本的發布情況如下:
-GB15982-1995。

 

醫院消毒衛生標準

1 范圍

本標準規定了醫院消毒衛生標準、醫院消毒管理要求和檢查方法。
本標準適用于各級各類醫療機構。各級疾病預防控制機構和采血供血機構按照規定執行。

2 規范性引用文件。

以下文件對本標準的應用至關重要。所有注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。最新版本(包括所有修改單)適用于本文件。
GB4789.3食品微生物學檢驗大腸菌群計數。
食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗GB4789.4。
GB/T489.11食品衛生微生物學檢驗溶血性鏈球菌檢驗。
GB5749生活飲用水衛生標準。
GB7918.4化妝品微生物標準檢驗方法綠膿桿菌。
GB7918.5化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌。
GB18466醫療機構水污染物排放標準。
GB19082醫用一次性防護服技術要求。
GB19083醫用防護口罩技術要求。
GB19193疫源消毒總則。
GB19258紫外線殺菌燈。
GB50333醫院潔凈手術部建筑技術規范。
WS310.1醫院消毒供應中心第一部分:管理規范。
WS310.2醫院消毒供應中心第二部分:清洗消毒及滅菌技術操作規范。
WS310.3醫院消毒供應中心第三部分:清洗消毒及滅菌效果監測標準。
WS/T311醫院隔離技術規范。
WS/T313醫務人員手衛生規范。
YY0469醫用外科口罩技術要求。
YY0572血液透析及相關治療用水。
消毒技術規范衛生部。
國家環??偩轴t院污水處理技術指南。
中華人民共和國藥典衛生部。
衛生部醫療衛生機構醫療廢物管理辦法。

 

3 以下術語和定義適用于本文件。

3.1消毒產品disinfectionproduct。列入衛生部《消毒產品分類目錄》,用于醫院消毒的消毒劑、消毒器械和衛生用品。
3.2醫療器械medicaldevice/healthcareproduct。
用于診斷、治療、護理、支持和替代的設備、設備和物品的總稱。根據使用中感染的風險程度,分為高危醫療器械、中危醫療器械和低危醫療器械。
3.2.1高危醫療器械criticaldevice/items。
進入正常的無菌組織,脈管系統或無菌體液(如血液)流過,一旦被微生物污染,就會導致極高的感染風險。
3.2.2中度危險性醫療器械semi-criticaldevice/items。
直接或間接接觸粘膜的設備。
3.2.3低危醫療器材no-criticaldevice/items。
只接觸完整皮膚而不接觸粘膜的設備。
3.3滅菌sterilization。在醫療器械上殺滅或清除所有微生物。滅菌的無菌保證水平應達到10-6。
3.4高水平消毒high-leveldisinfection。殺滅各種細菌繁殖體、病毒、真菌及其孢子和絕大多數細菌孢子。
3.5中水平消毒intermediate-leveldisinfection。殺滅除細菌芽孢外的各種病原微生物。
3.6低水平消毒low-leveldisinfection。只能殺滅細菌繁殖體(分枝桿菌除外)和親脂性病毒。
3.7多種耐藥菌multidrug-resistantorganism;MDRO。三種或三種以上的抗三種以上抗菌藥物同時呈現耐藥細菌。常見的多種耐藥細菌包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐萬古霉素腸球菌(VRE)、超廣譜β一內酰胺酶(ESBLS)細菌、耐碳青霉烯抗菌藥物腸桿菌(CRE)(如新德里金屬β內酰胺酶[NDM-1]或碳青霉烯酶[KPC]腸桿菌)、耐碳青霉烯抗菌藥物鮑曼不動桿菌(CR-AB)、多種耐藥/泛耐藥銅綠假單胞菌(MDR/PDR-PA)和多種耐藥結核分枝桿菌。

 

4 醫院消毒衛生要求。

4.1各種環境空氣,物體表面。
4.1.1菌落總數應符合表1要求。
第一類環境是采用空氣清潔技術的診斷和治療場所,分為清潔手術部和其他清潔場所。第二類環境為非潔凈手術部(室);產房;導管室;血液病房、燒傷病房等保護性隔離病房;重癥監護病房;新生兒室等。第三類環境為母嬰同室;消毒供應中心檢查包裝滅菌區和無菌物品儲存區;血液透析中心(室);其他普通住院病房等。第四類環境為普通門(急診)及其檢查、治療室;傳染病科門診和病房。

 

1  各類環境空氣、物體表面菌落總數衛生標準

 

環境類別

空氣平均菌落數a

物體表面平均菌落數CFU/cm2

CFU/皿

CFU/m3

 I類環境

潔凈手術室

符合GB 50333要求

150

50

其他潔凈場所

4. 0(30 min)b

Ⅱ類環境

4. 0(15 min)

--

50

Ⅲ類環境

4. 0(5 min)

--

100

Ⅳ類環境

4.0(5 min)

--

100

a CFU/皿為平板暴露法,CFU/m3為空氣采樣器法。

b 平板暴露法檢測時的平板暴露時間。

4.1.2當涉嫌醫院感染或疑似暴發與醫院環境有關時,應進行目標微生物檢測。
4.2醫務人員手。
4.2.1消毒后,醫務人員手表面菌落總數應≤10CFU/cm2。
4.2.2外科手消毒后,醫務人員手表面菌落總數應≤5CFU/cm2。
4.3醫療器械。
4.3.1高危醫療器械應無菌。
4.3.2中度危險醫療器械菌落總數應≤20CFU/件(CFU/g或CFU/100cm2),不得檢測致病微生物。
4.3.3低度危險醫療器械菌落總數應≤200CFU/件(CFU/g或CFU/100cm2),不得檢測致病微生物。
4.4治療用水。
血液透析相關治療用水應符合YY0572要求;其他治療用水應符合相應的衛生標準。
4.5防護用品。
醫用防護口罩、外科口罩、一次性防護服等防護用品應符合GB19083.YY0469和GB19082
4.6消毒劑。
4.6.1滅菌劑。皮膚粘膜消毒劑應采用純化水或無菌水,其他消毒劑應符合GB5749的要求。
4.6.2使用中消毒劑的有效濃度應符合使用要求;每天使用前應監測連續消毒劑的有效濃度。
4.6.3滅菌消毒劑的菌落總數為0CFU/ml;皮膚粘膜消毒劑的菌落總數應符合相應標準要求;其他消毒劑的菌落總數應≤100CFU/ml,不得檢測致病微生物。
4.7消毒器械。
4.7.1使用中消毒殺菌因子強度應符合使用要求。紫外線燈應符合GB19258的要求,紫外線燈(30W)的輻射照度值應≥70uW/cm2。
4.7.24.7.2工作環境中產生的有害物質濃度(強度)應符合有關規定。臭氧消毒設備的工作環境臭氧濃度應為0.16mg/m3。環氧乙烷滅菌器的工作環境應為2mg/m3。
4.8污水處理。
污水排放應符合GB18466的要求。
4.9疫點(區)消毒。
消毒效果應符合GB19193的要求。

5 醫院消毒管理要求

5.1建筑布局及消毒隔離設施。
5.1.1建筑設計和工作流程應滿足傳染病防治和醫院感染控制的需要,消毒隔離設施配置應滿足。
WS/T311及《消毒技術規范》相關規定。
5.1.2傳染病科、消毒供應中心(室)、手術部(室)、重癥監護病房、血液透析中心(室)、新生兒室、內鏡中心(室)、口腔科等重點部門的建筑布局和消毒隔離應符合相關規定。
5.1.3潔凈場所的設計.驗收參照GB50333的要求,完成全性能監測應由合格的第三方單位完成。
5.1.4II類環境及門診(急診)。病房等診療場所應按WS/T313要求配置合適的手衛生設施,并提供洗手清潔劑、手消毒劑和干手設施。
5.2消毒產品使用管理。
5.2.1使用的消毒產品應符合國家有關法律法規、標準、規范等管理規定,并按照批準或規定的范圍和方法使用。
5.2.2含氯消毒劑、過氧化氫消毒劑等揮發性消毒劑應配備現用消毒劑;過氧乙酸、二氧化氯等二元消毒劑活化后應立即使用。使用化學消毒和滅菌的醫療設備,使用前應用無菌水(過濾后的生活飲用水可用于高水平消毒內鏡)充分沖洗,以去除殘留物。不得使用過期和無效的消毒劑。醫療設備不得采用甲醛自然熏蒸法進行消毒。滅菌管腔醫療設備不得采用戊二醛熏蒸法進行消毒。
5.2.3滅菌器需要驗證滅菌效果的,應當由省級以上衛生行政部門認定的消毒鑒定實驗室進行檢測。滅菌物品的無菌檢查應當按照《中華人民共和國藥典》和《無菌檢查法》的要求進行。使用消毒設備滅菌的消毒者,經培訓合格后方可上崗。
5.3重復清洗醫療器械。
按WS310.2執行清洗程序。對傳染病病原體污染有特殊要求的醫療器械,應先消毒后清洗。
5.4消毒滅菌方法選擇原則。
5.4.1高危醫療器械在使用前應進行滅菌。使用中度危險醫療器械前,應選擇高水平消毒或中水平消毒。使用低危險設備前,可選擇低水平消毒或保持清潔。
5.4.2耐濕性。耐熱的醫療設備應首選壓力蒸汽滅菌;管腔和(或)閥門設備應采用滅菌程序或外部設備供應商提供的滅菌方法。
5.4.3玻璃滅菌是玻璃設備、油劑和干粉物品的首選;其他方法應符合《消毒技術規范》的規定。
5.4.4不耐熱、不耐濕的醫療器械應選用經國家衛生行政部門批準的低溫滅菌方法。
5.4.5重復使用的氧氣濕化瓶.吸引瓶.嬰兒暖箱水瓶和加熱加濕罐應采用高水平消毒。
5.5環境.物體表面消毒。
5.5.1環境。物體表面應保持清潔;肉眼可見污染時應及時清潔消毒。
5.5.2經常接觸的物體表面,如治療車、床欄、床頭柜、門把手、燈開關、水龍頭等,應每天清潔消毒。
5.5.3當患者的血液、嘔吐物、糞便或病原微生物被污染時,應根據具體情況選擇中等水平以上的消毒方法。對于少量(10ml)的飛濺,可在消毒前進行清潔;對于大量(>10ml)的血液或體液飛濺,應使用吸濕材料去除可見污染,然后進行清潔和消毒。
5.5.4人員流動頻繁。擁擠的診療場所應每天工作后進行清潔和消毒。傳染病科。重癥監護病房。保護隔離病房(如血液病房。燒傷病房)。耐藥菌和多種耐藥菌污染的診療場所應隨時消毒和終末消毒。
5.5.5拖把(頭)和抹布應清洗、消毒、干燥后備用。建議使用脫卸拖頭。
5.6通風和空氣消毒。
5.6.1應采用自然通風和(或)機械通風,確保診療場所的空氣循環和通風次數;采用機械通風時,重癥監護室等重點部門應采用頂送風、下回風,建立合理的氣流組織。
5.6.2呼吸道發熱門診及其隔離觀察室(區)。呼吸道傳染病收治病房采用集中空調通風系統的,應在通風系統中安裝空氣消毒裝置。無空氣清潔技術的手術室、重癥監護病房、保護性隔離病房(如血液病房、燒傷病房)應在通風系統中安裝空氣消毒裝置。
5.6.3空氣消毒方法應遵循《消毒技術規范》?;瘜W噴霧不宜用于空氣消毒。
5.7消毒供應中心(室)管理。
WS.310要求消毒供應中心(室)的建筑布局及清潔。
5.8污水污水處理。
5.8.1醫院污水處理設施的設計、建設和管理應符合GB18466和《醫院污水處理技術指南》的要求。
5.8.2醫療廢物管理應符合《醫療廢物管理條例》和《醫療衛生機構醫療廢物管理辦法》的要求。
5.9疫點(區)消毒。應符合GB19193的要求。

 

附錄A

(規范性附錄)

采樣及檢查方法

A.1采樣檢查原則。
A.1.1取樣后,應盡快對樣品進行相應指標的檢測,送檢時間不得超過4h;樣品保存在O℃~4℃時,送檢時間不得超過24h。
A.1.2不建議醫院對滅菌物品進行常規無菌檢查。當流行病學調查懷疑醫院感染事件與滅菌物品有關時,應進行相應物品的無菌檢查。常規監督檢查不得進行致病性微生物檢測,涉及疑似醫院感染爆發、醫院感染爆發調查或工作中懷疑微生物污染時,應進行目標微生物檢測。
A.1.3可使用經驗證的現場快速檢測儀器監督篩查環境、物體表面等微生物污染和醫療器械清潔度;也可用于醫院清潔效果檢查和清潔程序的評價和驗證。
A.2空氣微生物污染檢查方法。
A.2.1采樣時間。
一類環境在清潔系統自凈后與從事醫療活動前取樣;二、三、四類環境在消毒或規定通風后與從事醫療活動前取樣。
A.2.2檢測方法。
A.2.2.1I環境可選用平板暴露法和空氣采樣器法,參照GB50333《醫院潔凈手術部建筑技術規范》要求進行檢測??諝獠蓸悠鞣蛇x用六級沖擊式空氣采樣器或其他經驗證的空氣采樣器。檢測時,采樣器應放置在室內中心0.8m~l.5m的高度,并按照采樣器使用說明書操作,每次采樣時間不得超過30min。如果房間大于10m2,每增加10m2增加一個采樣點。
A.2.2.2、三、四類環境采用平板暴露法。室內面積≤30m2,內、中、外對角線3點,內、外點距墻1m;室內面積>30m2,4角和中心5點,4角布點距墻1m。普通營養瓊脂平板(直徑90mm)放置各取樣點,取樣高度為0.8m~l.5m;取樣時,打開平板蓋,扣在平板旁邊,暴露規定時間(二類環境暴露15min,三類環境暴露5min),蓋上平板蓋及時檢查。
A.2.2.3將36℃±1℃的恒溫箱培養48h,計數菌落數,必要時分離致病微生物。
A.2.3結果計算。
A.2.3.1平板暴露法按平均每皿菌落數報告:CFU/(皿暴露時間)。
A.2.3.2型(1)空氣采樣器法的計算公式:

空氣菌落總數

A.3物體表面微生物污染檢測方法。
A.3.1采樣時間。
對潛在污染區毒后采樣。清潔區根據現場情況確定。
采樣面積A.3.2。
表面≥100cm2,取100cm2。
A.3.3采樣方法。
將5cm×5cm滅菌規格板放在被檢物體表面,用浸有無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水或生理鹽水取樣液,在規格板內水平、垂直涂抹5次,然后轉動棉拭子,連續取樣1~4個規格板面積,切斷手接觸部分,將棉拭子放入裝有10ml取樣液的試管中進行檢查。門把手等小物體直接用棉拭子取樣。如果取樣物體表面有消毒劑殘留,取樣液應含有相應的中和劑。
A.3.4檢測方法。
采樣管充分振蕩后,取不同稀釋倍數的洗脫液1.0ml接種平盤,將熔化營養瓊脂培養基每盤冷至40℃~45℃,注入15ml~20ml,36℃±1℃恒溫箱48h,計數菌落數,必要時分離致病微生物。
A.3.5結果計算[如式(A.2)]

物體表面菌落總數

A.4醫務人員手衛生檢查方法。
A.4.1采樣時間。
在接觸病人或從事醫療活動前,取樣手部衛生后。
用無菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水取樣液將棉拭子從手指曲面到手指來回涂抹兩次(一只手涂抹面積約30cm2),然后轉動取樣棉拭子,切斷手接觸部位,將棉拭子放入裝有10ml取樣液的試管中進行檢查。取樣面積按平方厘米(cm2)計算。如果取樣時手上有消毒劑殘留,取樣液應含有相應的中和劑。
A.4.2采樣方法。
A.4.3檢測方法。
采樣管充分振蕩后,取不同稀釋倍數的洗脫液1.OML接種平盤,將熔化營養瓊脂培養基每盤冷至40℃~45℃,注入15ml~20ml,36℃±1℃恒溫箱48h,計數菌落數,必要時分離致病微生物。
A.4.4結果計算[如式(A.3)]

A.5醫療器材檢查方法。
A.5.1采樣時間。
消毒或滅菌后,在儲存有效期內取樣。
A.5.2滅菌醫療器材檢查方法。
A.5.2.1可采用破壞性方法取樣的,如一次性輸液(血)器、注射器、注射針等,按照《中華人民共和國藥典》中的無菌檢查法進行。對于不能采用破壞性方法取樣的醫療設備,在環境清潔度1萬級以下的單向流空氣區域或隔離系統中,將浸入無菌生理鹽水取樣液的棉拭子涂抹在被檢物體表面,取樣全部表面或不少于100cm2;然后將棉拭子除去手接觸部分進行無菌檢查。
A.5.2.2牙科手機:每部手機應放置在單向流空氣區域或隔離系統中,環境潔凈度在10000級以下的局部潔凈度在100級以下,分別放置在含有20ml~25ml采樣液的無菌大試管(內徑25mm)中,液位高度應大于4.0cm,在渦旋混合器上沖擊30s以上,取洗脫液進行無菌檢查。
A.5.3消毒醫療器材的檢查方法。
A.5.3.1全部可放入無菌試管,用洗脫液浸泡后震蕩30s以上,取洗脫液1.OML接種平皿,將熔化營養瓊脂培養基每皿倒入15ml~20ml,36℃±1℃恒溫箱48h,計數菌落數(CFU/件),必要時分離致病微生物。
A.5.3.2如果可以通過破壞性方法取樣,則在100級超凈工作臺上取1glog樣品,放入配有10ml采樣液的試管中進行洗脫,取洗脫液1.OmL接種平皿,計數菌落數(CFU/g),必要時分離致病性微生物。對于不能用破壞性方法取樣的醫療器械,在100級超凈工作臺上,用浸入無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣。
A.5.3.3消毒后內鏡:取清洗消毒后內鏡,用無菌注射器提取含有相應中和劑的50ml洗脫液,從活檢口注入洗滌內鏡管道,并充分收集(蠕動泵)進行檢查。將洗脫液充分混合,取洗脫液1.0ml接種平板,將熔化營養瓊脂培養基倒入15ml~20ml,36℃±1℃恒溫箱48h,計數菌落數(CFU/件)。剩余洗脫液在無菌條件下用濾膜(0.45μm)過濾濃縮,將濾膜連接到凝固的營養瓊脂平板上(注意不要產生氣泡),在36℃±1℃溫箱中培養48h,計數菌落數。
當濾膜法不能計數時:
菌落總數(CFU/件)=m(CFU/平板)×50...(A.4)
式中:
m-平行平板平均菌落數。
濾膜法可計數時:
菌落總數(CFU/件)=m(CFU/平板)mf(CFU/濾膜)...(A.5)
式中:
m-平行平板平均菌落數;
mf-濾膜上的菌落數。
A.6消毒劑檢查方法。
A.6.1消毒劑采樣。
采樣分為庫存消毒劑和使用中的消毒劑。
A.6.2消毒劑有效成分含量檢查方法。
庫存消毒劑的有效成分含量應按照《消毒技術規范》或產品企業標準進行檢測;上述方法可用于測量消毒劑的有效濃度,也可用于監測國家衛生行政部門批準的消毒劑濃度試紙(卡)。
A.6.3采用中消毒劑染菌量檢查方法。
A.6.3.1用無菌吸管按無菌操作方法吸收1.0ml檢測消毒劑,加入9ml中和劑混合均勻。醇類和酚類消毒劑用普通營養肉湯中和,含氯消毒劑,含碘消毒劑和過氧化物消毒劑0.1%硫代硫酸鈉中和劑,洗必泰,季銨鹽消毒劑含0.3%吐溫80.3%卵磷脂中和劑,醛類消毒劑含0.3%甘氨酸中和劑。
A.6.3.2用無菌吸管吸收一定稀釋比例的中和后混合物1.0ml接種平皿,將熔化營養瓊脂培養基倒入15ml~20ml,冷至40℃~45℃,36℃±1℃恒溫箱培養72h,計數菌落數;必要時分離致病微生物。
消毒劑染菌量(CFU/ml)=平均每株菌落數×10×稀釋倍數...(A.6)
A.7水檢方法。
YY0572檢測血液透析相關治療用水。其他治療用水按相關標準執行。
A.8紫外線燈檢查方法。
A.8.1紫外線燈采樣。
采樣分為庫存紫外線燈和使用中的紫外線燈。
A.8.2檢查庫存(新啟用)紫外線燈輻射照度值。
按GB19258進行。
A.8.3采用中紫外線燈輻射照度值檢查方法。
A.8.3.1儀器法。打開紫外線燈5min后,將測定波長為253.7nm的紫外線輻射計探頭放置在被檢紫外線燈下垂直距離1m的中心。儀器穩定后,所示數據為紫外線燈的輻射照度值。
A.8.3.2指示卡法。打開紫外線燈5min后,將指示卡放置在紫外線燈下垂直距離1m處,圖案一側向上,照射1min,觀察指示卡色塊的顏色,并將其與標準色塊進行比較。
A.8.4注意事項。
紫外線輻照計應當在計量部門批準的有效期內使用;紫外線監測指示卡應當經國家衛生行政部門批準,并在產品有效期內使用。
A.9消毒器械檢查方法。
A.9.1殺菌因子強度測定:按照《消毒技術規范》或企業標準規定的方法進行檢測。
A.9.2工作環境中有害物質濃度(強度)的測定:按照《消毒技術規范》或相關標準規定的方法進行測試。
A.10醫院污水檢查方法。
檢測按GB18466規定進行。
A.11疫點(區)消毒效果檢測方法。
檢測按GB19193規定進行。
A.12大腸菌群檢查方法。
檢測按GB4789.3進行。
A.13沙門茵檢查方法。
檢測按GB4789.4進行。
A.14乙型溶血性鏈球菌檢測方法。
檢測按GB/T4789.11進行。
A.15銅綠假單胞菌檢查方法。
檢測按GB7918.4進行。
A.16金黃色葡萄球菌檢查方法。
檢測按GB7918.5進行。
A.17其他目標微生物檢測方法。
按相關檢測方法進行。

 

附錄B

(規范性附錄)

試劑和培養基
B.10.03 moI/L磷酸鹽緩沖液(0.03 moI/L PBS)
    稱取磷酸氫二鈉2.84 g,磷酸二氫鉀1.36 g,加入到1000 mL蒸餾水中,待完全溶解后,調pH至7. 2~7.4,于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B.2洗脫液
    稱取蛋白胨10. 00 g,氯化鈉8.50 g,吐溫-80  1.0mL,加入到1 000 mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液中,加熱溶解后調pH至7.2~7.4,于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B.3生理鹽水
稱取氯化鈉8. 50 g,溶解于1000 mL蒸餾水中,于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B.4  革蘭染色液及染色方法
B. 4.1結晶紫染色液:稱取結晶紫1.00 g,溶解于20 mL 95%酒精中,然后與80 mL 1%草酸銨水溶液混合。
B.4.2革蘭碘液:稱取碘1. 00 g,碘化鉀2.00 g,混合后加入蒸餾水少許,充分振搖,待完全溶解后,再加蒸餾水至300 mL,混勻。
B.4.3沙黃復染液:稱取沙黃0. 25 g,溶解于10 mL 95%酒精溶液中,然后加入90 mL蒸餾水,混勻。
B.4.4染色方法如下:
    a)將涂片在火焰上固定。
    b)滴加結晶紫染色液,作用1 min,水洗。
    c)滴加革蘭碘液,作用1min,水洗。
    d)酒精脫色30 s;或將酒精滴滿整個涂片,立即傾去,再用酒精滴滿整個涂片,脫色10 s。
    e)水洗,滴沙黃復染液,作用1 min,水洗。
    f)待干鏡檢。
B.5人(兔)血漿
    取滅菌3.8%檸檬酸鈉1份,加人(兔)全血4份,混勻靜置,3 000 rmin離心5 min,取上清,棄血球
B.6  普通營養瓊脂培養基
B.6.1  成分:蛋白胨10 g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、瓊脂15 g、蒸餾水1000 mL。
B.6.2制作方法:除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中,調pH7.27.4,加入瓊脂,加熱溶解,分裝于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B.7血瓊脂培養基
B.7.1  成分:營養瓊脂100 mL、脫纖維羊血(或兔血)10 mL。
B.7.2制作方法:將營養瓊脂加熱熔化待冷至50℃左右,以無菌操作將10 mL脫纖維血加入后搖勻,傾注平皿,置冰箱備用。
B.-厭氧菌培養基
B.8.1成分:酪胨(胰酶水解)15 g、牛肉膏3g、葡萄糖5g、氯化鈉2.5 g、L-胱氨酸0.5 g、硫乙醇酸鈉0.5 g、酵母浸出粉5 g、新鮮配制的0.1%刃天青溶液1o mL或新配制的0.2%亞甲藍溶液0.5 mL、瓊脂0.5 g0. 7g、蒸餾水1 000 mL。
B.8.2制作方法:除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分加入蒸餾水中,微溫溶解后,調pH至弱堿性,煮沸、濾清,加入葡萄糖和刃天青溶液,搖勻,調pH6.97.3,分裝后115℃壓力蒸汽滅菌30 min。
B.9 SCDLP液體培養基
B.9.1  成分:酪蛋白胨17 g、大豆蛋白胨3g、葡萄糖2.5 g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀2.5 g、卵磷脂lg、吐溫-80  7g、蒸餾水1 000 mL。
B.9.2制作方法:將各種成分混合(如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替),加熱溶解后,調pH7.27.3,分裝于121℃壓力蒸汽滅菌20 min,搖勻,冷至25℃使用。
B.10伊紅美藍培養基
B.10.1成分:蛋白胨10 g、乳糖10 g、磷酸二氫鉀2g、2%伊紅溶液2 mL、0.65%美藍溶液1 mL、瓊脂17 g、蒸餾水1000 mL。
B.10.2制作方法:將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,調pH7.1,分裝后121℃壓力蒸汽滅菌20 min。臨用時,以無菌操作加入乳糖并加熱溶化瓊脂,冷至50℃時,加入伊紅和美藍溶液搖勻,傾注平皿,置4℃冰箱備用。
B.11 0.5%葡萄糖肉湯培養基
B.11.1  成分:胨10 g、氯化鈉5g、葡萄糖5g、肉浸液1000 mL。
B.11.2制作方法:取胨與氯化鈉加入肉浸液內,微溫溶解后,調pH至弱堿性,煮沸,加入葡萄糖溶解后,搖勻,濾清,調pH7.07.4,分裝,于115℃壓力蒸汽滅菌30 min。
B.12甘露醇培養基
B.12.1  成分:蛋白胨10 g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、甘露醇10 g、0.2%溴麝香草酚藍溶液12 mL、蒸餾水1 000 mL。
B.12.2 將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加入蒸餾水中,加熱溶解,調pH7.4,加入甘露醇和溴麝香草酚藍混勻后,分裝,于115壓力蒸汽滅菌20 min。
B13  乳糖膽鹽發酵管 GB 15982-2012
B13.1成分:蛋白胨20 g、豬膽鹽(或牛,羊膽鹽)5g、乳糖10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25 mL、蒸餾水1 000mL。
B13.2制作方法:將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中,調pH7.4,加入0.04%溴甲酚紫水溶液,分裝(每管10 mL),并放入一個發酵管,于115壓力蒸汽滅菌15 min。
B14乳糖發酵管
B14.1  成分:蛋白胨20 g、乳糖10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸餾水1 000 mL。
B14.2制作方法:將蛋白胨及乳糖溶解于蒸餾水中,調pH7.4,加入0.04%溴甲酚紫水溶液,分裝(每管10 mL),并放入一個發酵管,于115壓力蒸汽滅菌15 min。
B15溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基
B15.1  成分:蛋白胨10 g、葡萄糖5g、2%溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL、蒸餾水1000 mL。
B15.2制作方法:將蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸餾水中,調pH7O7.2,加入2%溴甲酚紫酒精溶液,搖勻后,分裝(每管5 mL),并放入一個發酵管,于115壓力蒸汽滅菌30 min,置4冰箱備用。
B16綠膿菌素測定用培養基
B16.1  20 g、氯化鎂(無水)1.4 g、硫酸鉀10 g、甘油10 mL、瓊脂18 g20 g、蒸餾水1 000 mL。
B16.2制作方法:取胨、氯化鎂、硫酸鉀加入水中,微溫使溶解,調節pH使滅菌后為7.27.4,分裝于小試管,滅菌。
B17  明膠培養基
B17.1  5 g、明膠120 g、牛肉浸出粉3g、蒸餾水1 000 mL。
B17.2取上述各成分加入水中,浸泡約20 min,隨時攪拌,加熱使溶解,調節pH值使滅菌后為7.27.4,分裝于小試管,滅菌。
B18  注意事項
B18.1  雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分為乳糖膽鹽發酵管的2倍;3倍濃縮乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分為乳糖膽鹽發酵管的3倍。
B18.2培養基用的試管口和三角燒瓶口應用棉塞或硅膠制成的塞子,再用牛皮紙包好。
B18.3試劑與培養基配制好后應置清潔處保存,常溫下不超過1個月。培養基推薦4冷藏保存。

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